罗氏X-TremeGENE 便是新一代转染试剂的佼佼者,升级版的多组分混合试剂,兼具极高转染效率和极低细胞毒性,在超过350株真核细胞株中获得了高效转染的验证,尤其针对难转染细胞株亦有出色表现。
两种试剂对CHO-K1 细胞转染带GFP标记的质粒,A和C是转染后荧光显微图,B和D是明场显微图. 与竞争产品比较,X-tremeGENE HP表现出更优的转染效率更低的细胞毒性
不同试剂在含血清的培养基中对四种很难转染的细胞株进行转染,X-tremeGENE HP 试剂远优于其他试剂
超过350种细胞株的高效转染验证
还有一个好消息
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默克自2015年成为罗氏生化试剂的全球***代理,可以提供从细胞培养和功能分析、基因机理研究到蛋白机理研究的完整方案: RNAiMAX转染试剂是先进、高效的siRNA输送解决方案。动物细胞转染试剂报价
对 HepG2 细胞转染效率的比较
右图:使用以上转染试剂将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产商的提供的转染步骤转染到 HepG2 细胞(在胶原预处理的培养皿中培养)。在转染 48 小时之后,用流式细胞仪检测 GFP 阳性细胞(%)和荧光强度。
左图:血清和***存在的条件下能提高 LipoD293 试剂(升级版)对在 HepG2 细胞的转染效率。通过三种不同的条件下转染 HepG2 细胞(生长在胶原处理的培养皿上)---无血清和***,10% 血清和***的存在,转染 5 小时后换液和不换液。
上海常用转染试剂选购惊艳登场!临床级载体生产必备转染试剂。
用LipoFectMax™转染Hela细胞,左图转染GFP cDNA,右图共转染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。转染siRNA后可以从右图明显看到基因沉默。
4适用于神经细胞的转染图4. 用LipoFectMax™ 和LipoFectamine®2000分别对小鼠神经元细胞进行转染绿色荧光白蛋白(GFP),转染24小时后观察转染效果,LipoFectMax™ 转染效率(左图)比LipoFectamine®2000(右图)高5倍。
LipoFectMax™ 转染试剂转染试剂操作流程
细胞毒性低图2.LipoFectMax™ ,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作,通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性。
在难转染细胞(原代大鼠动脉平滑肌细胞)转染效率的比较
图片由芝加哥大学肺和重症护理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供
制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用 LipoD293™试剂(左图)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右图)分别将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染 24 小时后,用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光,以此来评价转染效率。
对难转染细胞 LNCap 细胞转染效率的比较
图片由罗斯威尔公园**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供
无论有无血清、***存在均可获得很高的转染效率。
胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要!!当然也要保证细胞状态特别好,没有细微污染,铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦!
载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统,当然使用三质粒系统的小伙伴居多,一定要选择成熟商业化的载体系统!载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失,或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯:建议目的基因载体和阴性对照GFP 载体是同一批,且建议每次包装都如此操作,要保证目的基因的表达载体构建纯化良好,质粒间比例得当,并且对质粒进行酶切验证. 转染复合物制备完成; 混匀后室温下孵育15-20分钟,直接取10μL加入已铺好细胞的孔中.悬浮细胞转染试剂选购
pei转染试剂说明书主要内容是什么?动物细胞转染试剂报价
在选择转染方法时,需考虑您希望输送的运载物(DNA、RNA或蛋白质)以及您希望转染的细胞类型。您可通过下表选择各类阳离子脂质体转染试剂和Neon转染系统。
我们提供了各种DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA输送选择,让您可以对自己的结果更加自信.***的输送效果—可转染多种类型的细胞无毒性作用—您之所以能看到结果,是因为核酸存在,而不是因为试剂需要的优化工作更少—针对大多数细胞类型提供了快速、简便的实验方案
连续细胞系 具有无限增殖的潜能,通常要比原代或有限细胞更易处理。但由于此类细胞经历过基因改变而变得具有无限增殖能力,它们在培养过程中的表现可能无法必然地反映体内状态。
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